工程院食品安全院士团队

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亮点一、创新：增加了大肠菌群测试片法，并明确测试片应以发酵乳糖产酸产气为阳性结果判断依据，且性能符合 GB4789.28 中相关培养基的质量要求。 
亮点二、灵活：液体样品稀释明确了当样品不适宜进行体积取样时，按 6.1.1 固体和半固体样品称重操作。 
亮点三、省时：MPN计数法 复发酵试验培养时间由“ 48h±2h ”修改为“ 24-48h ”，若最短培养时间内得到阳性结果，则检验周期可缩短 24h。
亮点四、全面：
1）在平板法 9.2 接种与培养中增加“对于乳及乳制品，应置于 30℃±1℃ 培养 18h~ 24h 。”这是基于国内外文献报道，培养温度为 30 ℃ 时乳制品中大肠菌群平板计数的结果，显著高于培养温度为 36 ℃ 的计数结果，在国外相关标准中已将乳制品中大肠菌群平板计数培养温度规定为 30 ℃ 左右，以及修标单位经调查研究和实验验证后，作出的修订。
2）明确MPN 计数法初发酵试验，如接种体积超过 1mL ，则加到等体积的双料LST肉汤中；
3）MPN 计数法初发酵试验阳性结果描述由“ 观察倒管内是否有气泡产生 ”修改为“ 小倒管或产气收集装置内有气泡产生，或轻轻振摇 LST肉汤管 可见试管内有细密气泡不断上升者，判断为产气”，更加详细明了。
4）MPN计数法 的结果与报告增加“ 附录C 确定最适的 3个连续稀释度方法”，平板法的结果与报告增加“ 附录D 规定了大肠菌群菌落数的计算、数值修约和结果报告的方式，并给出了相关示例。”，新增附录让实验结果处理变得简单。

亮点一、与国际接轨：
1）参照 ISO 方法和经起草组验证，将 定性检验 和 MPN法 中的选择性增菌液体培养基由 LB1 和 LB2 修改为“ Fraser增菌肉汤(FB1、FB2)”；选择分离显色培养基“李斯特氏菌显色平板“修改为“OA李斯特氏菌显色平板”并在 附录A 培养基和试剂中增加了 OA李斯特氏菌显色培养基配方。
2）参照 ISO 等国际、国家标准，将平板计数规则“ 所有平板菌落数合计在  15CFU ～ 150CFU 之间的平板，计数典型菌落数。”修改为“所有平板典型和可疑菌落数合计在 15CFU ～ 150CFU 之间的平板，计数典型和可疑菌落数。”经验证可提高结果的稳定性。
亮点二、实惠省时：
1）结合我国现行有效的与单增李斯特菌限量指标相关的标准将平板计数，“ 8.2 样品的接种 ”将原来“ 每个稀释度的样品匀液分别吸取 1mL 以 0.3mL、0.3mL、0.4mL 的接种量分别接种 3块李斯特氏菌显色平板”修改为“ 每个稀释度分别吸取 0.1mL 样品匀液，接种1个 OA李斯特氏菌显色培养基（或其他等效的李斯 特氏菌显色培养基）平板 ”，大大减少了显色培养基的用量，又能满足现行产品标准需要。同时继续保留“ 0.3mL、0.3mL、0.4mL 涂布法”，满足检出限更低的需求和方法的延续性。
2）在“ 5.5 鉴定 ”中增加“ 如选择生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统，可不经 5.4 初步鉴定，直接从 TSA-YE平板或羊血平板上挑取可疑菌落，用生理盐水制备成浊度适当的菌悬液，使用微生物生化鉴定试剂盒或微生物生化 鉴定系统进行鉴定。”结合使用生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统实际情况，优化鉴定流程，缩短检验时长。
亮点三、严谨：
1）在 8.2 样品的接种中增加“ 8.2.3 从样品稀释至样品接种完毕不得超过 45min。”避免操作时间过长影响计数结果。
2）在“ 5.2 分离 ”中增加显色培养基菌落识别注意事项（避免假阴性和假阳性结果）：

“注1：一些单核细胞增生李斯特氏菌在 OA李斯特氏菌显色培养基上的菌落周围的晕圈不明显甚至没有晕圈。还有一些单核细胞增生李斯特氏菌在 OA李斯特氏菌显色培养基上的菌落周围的晕圈出现得比较迟缓，有时需要 4d 以上才出现。
注2：伊氏李斯特氏菌在 OA李斯特氏菌显色培养基上的菌落形态与单核细胞增生李斯特氏菌相似。”