细菌的生物化学试验(各种酶类试验)
发布时间：2025-02-20 浏览次数：62
不同细菌具有各自独特的酶系统，因而对底物的分解能力各异，其代谢的产物也不相同。这些代谢产物又各具有不同的生物化学特性，为此，可利用生物化学的方法测定这些代谢产物以鉴定细菌。本次内容主要介绍的为细菌生物化学试验中各种酶类试验与抑菌试验。
各种酶类试验
1、氧化酶试验
氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化的细胞色素C使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物。
常用方法有三种：
① 菌落法：直接滴加试剂于被检菌菌落上。
② 滤纸法：取洁净滤纸一小块，沾取菌少许，然后加试剂。
③ 试剂纸片法：将滤纸片浸泡于试剂中制成试剂纸片，取菌涂于试剂纸上。
细菌在与试剂接触10s内呈深紫色，为阳性。为保证结果的准确性，分别以铜绿假单胞菌和大肠埃希菌作为阳性和阴性对照。
主要用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别，前者为阴性，后者为阳性。奈瑟菌属、莫拉菌属细菌也呈阳性反应。
2、过氧化氢酶试验（触酶试验）
具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。取菌置于洁净的试管内或玻片上，然后滴加3%过氧化氢数滴，或直接滴加3%过氧化氢于不含血液的细菌培养物中，立即观察结果。
有大量气泡产生者为阳性，不产生气泡者为阴性。革兰阳性球菌中，葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶，而链球菌属为阴性，故此试验常用于革兰阳性球菌的初步分群。
3、硝酸盐还原试验
被检菌接种于硝酸盐培养基中，于35°C培养1~4d，将甲液（对氨基苯磺酸0.8g＋5mol/L醋酸100ml）、乙液（α-萘胺0.5g＋5mol/L醋酸100ml）等量混合后（约0.1ml）加入培养基内，立即观察结果。出现红色为阳性。若加入试剂后无颜色反应，可能是：
① 硝酸盐没有被还原，试验阴性；
② 硝酸盐被还原为氨和氮等其他产物而导致假阴性结果，这时应在试管内加入少许锌粉，如出现红色则表明试验确实为阴性。若仍不产生红色，表示试验为假阴性。
若要检查是否有氮气产生，可在培养基管内加一小导管，如有气泡产生，表示有氮气生成。
本试验在细菌鉴定中广泛应用。肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐；铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等假单胞菌可产生氮气；有些厌氧菌如韦荣球菌等试验也为阳性。
4、脂酶试验
将被检菌接种于上述培养基中，于37℃培养24h。培养基变为蓝色为阳性，阴性为粉红色或无色。
主要用于厌氧菌的鉴别。类杆菌属中的中间类杆菌产生脂酶，其他类杆菌则阴性；芽胞梭菌属中产芽胞梭菌、肉毒梭菌和诺维梭菌也有此酶，而其他梭菌阴性。
5、卵磷脂酶试验
将被检菌划线接种或点种于卵黄琼脂平板上，于35°C培养3~6h。若3h后在菌落周围形成乳白色混独环，即为阳性，6h后混独环可扩展至5~6mm。主要用于厌氧菌的鉴定。产气荚膜梭菌、诺维梭菌产生此酶，其他梭菌为阴性。
6、DNA酶试验
将被检菌点种于上述平板上，于35°C培养18~24h，然后用1mol/L盐酸覆盖平板，观察结果。
在菌落周围出现透明环为阳性，无透明环为阴性。在革兰阳性球菌中只有金黄色葡萄球菌产生DNA酶，在肠杆菌科中沙雷菌和变形杆菌产生此酶，故本试验可用于细菌的鉴别。
7、凝固酶试验
致病性葡萄球菌可产生两种凝固酶。一种是结合凝固酶，结合在细胞壁上，使血浆中的纤维蛋白原变成纤维蛋白而附着于细菌表面，发生凝集，可用玻片法测出。另一种是分泌至菌体外的游离凝固酶，作用类似凝血酶原物质，可被血浆中的协同因子激活变次凝血酶样物质，而使纤维蛋白原变成纤维蛋白，从而使血浆凝固，可用试管法测出。
（1）玻片法：兔血浆和盐水各一滴，分别置于洁净的玻片上，挑取被检菌分别与血浆和盐水混合。
（2）试管法：取试管2支，各加0.5ml人或兔血浆，挑取被检菌和阳性对照菌分别加入血浆中并混匀，于37°C水浴3～4h。
玻片法以血浆中有明显的颗粒出现而盐水中无自凝现象判为阳性；试管法以血浆凝固判为阳性。作为鉴定葡萄球菌致病性的重要指标，也是葡萄球菌鉴别时常用的一个试验。
8. CAMP试验
先以产β-溶血素的金黄色葡萄球菌划一横线接种于血琼脂平板上，再将被检菌与前一划线作垂直划线接种，两线不能相交，相距0.5～1cm，于37℃培养18～24h，观察结果。
每次试验都应设阴性和阳性对照。在两划线交界处出现箭头样的溶血区为阳性。在链球菌中，只有B群链球菌CAMP试验阳性，故可作为特异性鉴定。
9、胆汁溶菌试验
胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌，可能是由于胆汁降低细胞膜表面的张力，使细胞膜破损或使菌体裂解；或者是由于胆汁加速了肺炎链球菌本身自溶过程，促使细菌发生自溶。
（1）平板法：取10%去氧胆酸钠溶液一接种环，滴加于被测菌的菌落上，置35°C 30min后观察结果。
（2）试管法：被检菌培养物2支，各0.9ml，分别加入10%去氧胆酸钠溶液和生理盐水（对照管）0.1ml，摇匀后置35°C水浴10~30min，观察结果。
平板法以“菌落消失”判为阳性；试管法以“加胆盐的培养物变透明，而对照管仍混浊”判为阳性。主要用于肺炎链球菌与甲型链球菌的鉴别，前者阳性，后者阴性。
抑菌试验
1、O/129抑菌试验
（1）原理：O/129（二氨基蝶啶）对弧菌属细菌有抑制作用，而对气单胞菌属细菌无抑制作用。
（2）培养基：碱性琼脂平板。
（3）方法：将待检菌均匀涂布于碱性琼脂平板上，镊取O/129纸片（含药40）贴于平板上，35°C培养18~24h观察结果。
（4）结果：出现抑菌环为敏感，无抑菌环为耐药。
（5）应用：用于弧菌科的属间鉴别，弧菌属、邻单胞菌属对O/129敏感，而气单胞菌属耐药。
2、杆菌肽试验
将待检菌纯培养物（肉汤）均匀涂布于血液琼脂平板上，稍干后贴上0.04U/片的杆菌肽纸片，35°C培养18~24h观察结果。抑菌环直径＞10mm为敏感，抑菌环直径＜10mm为耐药。用于A群链球菌与非A群链球菌的鉴别。
3、奥普托欣（optochin）试验
将待检菌菌落或肉汤培养液均匀涂布于血液琼脂平板上，稍干后贴上含5μg/片的optochin纸片，35°C培养18~24h观察结果。抑菌环直径＞14mm为敏感，若抑菌环直径≤14mm，对此菌株应再做胆汁溶菌试验，以证实是否为肺炎链球菌。主要用于肺炎链球菌与其他链球菌的鉴别。
文章来源：环凯（官网：huankai.com）转载于“ 我是YY啊 ”公众号；原作者~ 妍妍丫丫。
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